Costa Rica | ABSCH-IRCC-CR-299462 | Certificat de respect des obligations internationalement reconnu | Access and Benefit-Sharing Clearing-House

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Certificat de respect des obligations internationalement reconnu (IRCC)

ABSCH-IRCC-CR-299462-1 | PDF | Imprimer |

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last updated: 08 juin 2026

Informations générales

Pays

Costa Rica

Identifiant unique CE-APA

ABSCH-IRCC-CR-299462-1

Numéro(s) de référence d’autres certificats de conformité reconnus à l’échelle internationale en lien avec ce permis.

Fournissez un résumé de la raison qui motive la mise à jour du fichier

Autorité de délivrance (autorité responsable de l’émission de ce permis)

- Autorité nationale compétente : | ABSCH-CNA-CR-202448-7

Autorité nationale compétente :

Technical Office of the National Commission for Biodiversity Management ()

National Commission for Biodiversity Management (CONAGEBIO), Ministry of Environment and Energy (MINAE)
Goicochea, San José
, Costa Rica
Téléphone : (+506) 22538416,

Télécopieur :

E-mail : info@conagebio.go.cr,

Site Web :

ABSCH-CNA-CR-202448-7

Détails du permis ou son équivalent

Numéro de référence du permis ou son équivalent

R-CM-UNA-002-2026-OT-CONAGEBIO

Références ou identificateurs nationaux supplémentaires

Laboratorio de Estudios Ecotoxicológicos (ECOTOX) del IRET (054-24): PharmaBat: Investigación de transferencia de contaminantes farmacéuticos del agua a la tierra y efecto en la salud de los murciélagos

La date de délivrance du permis ou son équivalent

20 mars 2026

La date de délivrance du permis ou son équivalent

20 mars 2029

Information sur le consentement préalable en connaissance de cause (CPCC)

Confirmation que le consentement préalable en connaissance de cause a.été obtenu ou accordé

Oui

Le fournisseur (la personne ou l'entité qui détient le droit d'accorder l'accès aux ressources génétiques conformément à la législation nationale)

- Organisation : Sistema Nacional de Áreas de Conservación (SINAC) | ABSCH-CON-CR-281727-1

Organisation :

Sistema Nacional de Áreas de Conservación (SINAC)

Agence gouvernementale (nationale/fédérale)

Oficina Central, Santa Rosa de Santo Domingo de Heredia Telefono: 2522-6500. Correo electrónico: info@sinac.go.cr / direccion.ejecutiva@sinac.go.cr.
Santo Domingo, Heredia
, Costa Rica
Téléphone : +50625226500,

Télécopieur :

E-mail : carol.sanchez@sinac.go.cr, gustavo.induni@sinac.go.cr,

Site Web : https://www.sinac.go.cr/,

Informations confidentielles

La personne ou entité à laquelle le consentement préalable en connaissance de cause a été accordé

- Organisation : Universidad Nacional de Costa Rica (UNA) | ABSCH-CON-CR-277311-3

Organisation :

Universidad Nacional de Costa Rica (UNA)

Établissement d'enseignement ou de recherche

Universidad Nacional, Campus Omar Dengo. Heredia, Costa Rica. Avenida 1, Calle 9. Código Postal: 86-3000
Heredia, Heredia
86-3000, Costa Rica
Téléphone : +50622773000,

Télécopieur :

E-mail : investigacion@una.cr, rectoria@una.cr, permisosconagebio@una.cr, kinndle.blanco.pena@una.ac.cr,

Site Web : https://www.una.ac.cr/,

Informations confidentielles

Information supplémentaire sur le consentement préalable en connaissance de cause

Documents ou liens supplémentaires sur le consentement préalable en connaissance de cause

CPI-SINAC-PI-ACTo-002-2026-1 firmado.pdf [ Spanish ]
CPI -ACC UNA_Kinndle Blanco 0001 Firmado.pdf [ Spanish ]
CPI-SINAC-PNI-ACAHN-0002-2026 ACAHN_UNA FIRMADO.pdf [ Spanish ]

Information sur les conditions convenues d’un commun accord

La confirmation que des conditions convenues d’un commun accord ont été établies

Oui

Informations supplémentaires sur les conditions convenues d’un commun accord

Documents supplémentaires sur les conditions convenues d’un commun accord

Objet ou ressource génétique(s)

Le sujet ou les ressources génétiques auxquels ce rapporte le certificat

Le sujet ou les ressources génétiques auxquels ce rapporte le certificat

Informations confidentielles

Données sur l’échantillon

Données taxonomiques

Coordonnées géographiques

We acknowledge the use of imagery provided by services from NASA’s Global Imagery Browse Services (GIBS), part of NASA’s Earth Observing System Data and Information System (EOSDIS).

Informations sur l’utilisation de la ou des ressources génétiques

Type d’utilisation permis par le permis ou son équivalent

Non-commercial

Informations supplémentaires sur les utilisations spécifiques couvertes par le permis ou son équivalent ainsi que les restrictions d’usage

Captura y muestreo de murciélagos:

En cada sitio de estudio se realizarán muestreos consecutivos durante el periodo de estudio. En cada muestreo se utilizarán entre 5 a 10 redes de niebla negras de nilón y de monofilamento de 12 metros de largo por 2,5 metros de alto y cinco paños (Avinet Ltd., Nueva York) según la topografía y las posibilidades de espacio del sitio. Las redes de niebla se mantendrán abiertas de las 17:45 horas hasta las 22:00 horas consecutivamente. Las redes se disponen a lo largo y ancho de quebradas, riachuelos, cuerpos de agua, senderos y zonas de paso en cada sitio de muestreo. Las redes se cerrarán por lluvia torrencial, tormenta o por razones de seguridad. Los murciélagos capturados serán colocados individualmente en bolsas de tela para su procesamiento. Cada individuo capturado será identificado a nivel de especie mediante claves dicotómicas (Timm, LaVal, & Rodríguez-H, 1999). También se registrará su sexo (macho o hembra de acuerdo a genitalia externa), edad (adulto o juvenil) mediante la osificación de las uniones de las falanges de los dedos cuatro y cinco, estado reproductivo (macho escrotado o no de acuerdo a genitalia externa, hembras preñadas, lactando o no de acuerdo a inspección de genitalia externa y estado de glándulas mamarias), longitud del antebrazo en milímetros (±0,05) mediante una regla metálica y peso en gramos (±0,5) mediante una balanza portátil (Pesola Ltd., Suiza).

En la sección de Recurso Genético, se incluyeron todas las especies que creemos que pueden estar en la zona. Esto se debe a que no es posible saber previamente qué especies son las que van a caer en la red.

Debido a que el muestreo es poco invasivo y los individuos se liberarán inmediatamente, de las especies más abundantes, se tomarán muestras de un máximo de 40 individuos por sitio de acceso.

Las redes de niebla serán revisadas por un equipo de al menos tres personas capacitadas en el manejo seguro de murciélagos y en procedimientos de bioseguridad. Las redes permanecerán abiertas únicamente durante el período de máxima actividad (entre el atardecer y las primeras horas de la noche) y serán revisadas cada 10–15 minutos para minimizar el tiempo de captura y reducir el estrés en los individuos.

Todo el personal usará equipo de protección personal (EPP) adecuado, que incluye guantes de nitrilo, mascarilla, ropa de manga larga. Los guantes de nitrilo se desinfectarán con alcohol al 70 % entre manipulaciones, para evitar la transmisión cruzada de patógenos entre individuos o hacia el personal. Los instrumentos de muestreo (pinzas, tijeras, punches, etc.) se esterilizarán entre muestras mediante inmersión en esterilix, alcohol, o flameado. De igual forma, las superficies de trabajo se desinfectarán regularmente. Seguiremos las guías propuestas por la red latinoamericana de murciélagos para manejo de murciélagos en campo (Suarez-(Suarez-Alvarez et al. 2020).

El personal cuenta con vacunación antirrábica vigente y conocimiento del protocolo de primeros auxilios ante mordeduras. Estas medidas aseguran el bienestar de los murciélagos, la seguridad del personal y el cumplimiento de las normas éticas y sanitarias aplicables. En la siguiente bibliografía se encuentra más detalle del manejo correspondiente: Suárez-Alvarez R, López-Berrizbeitia MF. Manual de Manejo de Murciélagos en Campo. 2020.

Sangre

Para cada individuo se colectará una pequeña muestra de sangre en tarjetas de papel filtro, las cuales pueden transportarse y almacenarse fácilmente sin necesidad de refrigeración. Específicamente, se puncionará la vena cefálica ubicada en la parte superior del ala del murciélago utilizando una aguja de calibre 30G para especies pequeñas y 27G para especies de mayor tamaño. A continuación, se colectará la gota de sangre con una micropipeta o un microtubo capilar heparinizado, y se depositará sobre la zona delimitada en tarjetas almacenadoras de proteínas Whatman™ 903. Las tarjetas se dejarán secar por aproximadamente 3 horas y se almacenarán en bolsas plásticas herméticas con sobres desecantes. Posteriormente, las muestras serán enviadas al Departamento de ingeniería Ambiental y de recursos de la Universidad Técnica de Dinamarca (Danmarks Tekniske Universitet DTU), donde se realizará la identificación y cuantificación de contaminantes mediante espectrometría de masas de alta resolución (LC-MS).

Hisopados

A cada individuo se le tomará una muestra de mucosa oral y saliva utilizando hisopos bucales estériles Puritan HydraFlock® de 3.5 mm de diámetro. El hisopo se introducirá cuidadosamente en la boca del murciélago y se frotarán suavemente las encías y el interior de las mejillas. Asimismo, se tomará un hisopado rectal introduciendo el hisopo no más de 5 mm en el recto, mientras se sostiene firmemente al animal. La punta del hisopo será cortada y almacenada en un microtubo con una solución estabilizadora de ADN y ARN. Posteriormente, estas muestras se utilizarán para extraer ADN y ARN tanto del murciélago como de virus y bacterias patógenas presentes en la muestra. El objetivo es describir la carga viral del individuo y correlacionarla con su exposición a contaminantes. El análisis molecular se realizará también en el Departamento de peces, vida silvestre y estudios ambientales de la Universidad Sueca de ciencias agrícolas (Sveriges lantbruksuniversitet SLU).

Heces

Se colectarán muestras de heces frescas de cada individuo colocándolo en una bolsa de tela justo después de su captura, una práctica estandarizada y común en estudios de campo. Los murciélagos permanecerán en la bolsa un máximo de tres horas, con revisiones cada 30 minutos para minimizar el estrés. Se recolectarán todas las heces depositadas en la bolsa, y las muestras serán transferidas a microtubos de 2 ml para su conservación mediante congelación. El análisis de contaminantes se llevará a cabo en el Laboratorio de Ecotoxicología del Instituto Regional de Sustancias Tóxicas (IRET) de la Universidad Nacional de Costa Rica, utilizando cromatografía líquida y espectrometría de masas (LC-MS) (Wilkinson et al., 2019).

Se tomarán además muestras adicionales de heces para el análisis de genes de resistencia antimicrobiana. Estas serán conservadas en microtubos con etanol al 70%. El ADN será extraído con el kit QIAGEN Fast DNA Stool Mini Kit y se realizará una PCR para amplificar genes de resistencia ampliamente conocidos (ej. CTX, TEM, SHV) (Devnath et al., 2023). Este análisis también se llevará a cabo en el laboratorio de ecotoxicología del IRET.

Pelo

Se cortará un mechón de pelo (área no mayor a 4 mm²) de la región intraescapular utilizando tijeras de punta redonda, para evitar causar daño al animal. La muestra se almacenará en microtubos plásticos a temperatura ambiente. Se analizarán isótopos estables de nitrógeno (¹⁵N) y carbono (¹³C) para determinar la dieta del individuo. Los análisis se realizarán en el Laboratorio de Isótopos Estables (UNA-SIL) de la Universidad Nacional.

Biopsias de ala

Se tomará una muestra de la membrana alar (patagio) utilizando un sacabocados estéril de 2 mm de diámetro. El ala del murciélago será extendida para ubicar un área libre de vasos sanguíneos prominentes y cercana al cuerpo, donde se ha demostrado que la regeneración es más rápida (2–3 semanas). La muestra de tejido será colocada en microtubos estériles con aproximadamente 0.7 g de sílica (Corthals et al. 2015). Estas muestras se transportarán congeladas (-20 °C) al Laboratorio de Ecotoxicología del IRET, donde se extraerá ADN genómico usando el kit QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen). El ADN será enviado para secuenciación al Departamento de peces, vida silvestre y estudios ambientales de la Universidad Sueca de ciencias agrícolas (Sveriges lantbruksuniversitet SLU).

Colecta de macroinvertebrados y aguas

Los sitios específicos de muestreo no están definidos. Con base en las características de cada uno, la seguridad del sitio y la posibilidad de detectar contaminantes, entre otras, definiremos cuáles son los mejores puntos para el muestreo.

La toma de muestras de macroinvertebrados y aguas se hará según protocolos existentes del IRET. El muestreo de macroinvertebrados se realizará recolectando los organismos con ayuda de una red tipo D durante 5 min en cada muestreo. Estas muestras serán almacenadas en alcohol 70% y posteriormente separadas e identificadas en el Laboratorio de Estudios Ecotoxicológicos (ECOTOX), de la Universidad Nacional.

En detalle, en cada sitio de estudio se realizarán muestreos para recolecta directa de larvas o ninfas de insectos acuáticos principalmente de la familia Chironomidae, aunque será posible colectar otras familias presentes, de acuerdo con las condiciones del sitio. Este muestreo se realizará con redes de mano o red de pateo tipo D de 500 micrómetros de ojo de malla en diferentes microhábitats de cada río (Ramírez, 2010).

Asimismo, se recolectará insectos en estado adulto por medio de trampas de emergencia colocadas en zonas calmas (empozadas) de los ríos durante 24-48 horas. De esta forma se logra recolectar insectos justo cuando emergen del agua, asegurando que provienen de dicho ecosistema. Adicionalmente, si no fuese posible colocar las trampas de emergencia por las características hidrológicas del río, se procederá a colocar trampas de luz en la ribera de los sitios de estudio durante 2-3 horas después del atardecer (Ramírez, 2010). En las trampas de luz se seleccionarán para la colecta sólo aquellos organismos que provienen de órdenes con estadíos larvales o ninfales acuáticos (por ej. Diptera, Trichoptera, Ephemeroptera).

Biofilm
El método consiste en colocar palitos limpios como sustratos artificiales en ríos o cuerpos de agua para permitir el crecimiento de un microfilm de algas durante un periodo determinado. Tras la exposición, los palitos se retiran y el biofilm adherido se raspa o enjuaga para su análisis en laboratorio. Este material permite evaluar la presencia de contaminantes, nutrientes o metales pesados, así como la composición y biomasa de las algas, sirviendo como indicador de la calidad del agua.

Sedimento

La colecta de sedimentos consiste en tomar muestras del material depositado en el fondo del cauce, aproximadamente 5-10 g con una pala de jardinería, evitando la superficie alterada. Las muestras se colocan en recipientes limpios y se conservan en frío hasta su análisis en laboratorio, donde se determinan concentraciones de metales pesados, hidrocarburos u otros contaminantes que se acumulan en los sedimentos y reflejan la calidad ambiental del ecosistema acuático.

Ectoparásitos

En caso de que se encontraran ectoparásitos en los murciélagos, se colectarán 30 de ellos por animal para su identificación macroscópica, utilizando para ello pinzas estériles por cada individuo.

Procedimientos, técnicas experimentales, técnicas de laboratorio y análisis de datos:

Sangre

En estas muestras se realizará una extracción por cromatografía líquida para cuantificar e identificar todos los metabolitos y proteínas presentes en las muestras de sangre colectadas en papel filtro usando espectrometría de masas. Para ello, las muestras serán enviadas al Departamento de Ingeniería Ambiental y de Recursos de la Universidad Técnica de Dinamarca (Danmarks Tekniske Universitet DTU), donde se realizará la identificación y cuantificación de contaminantes mediante espectrometría de masas de alta resolución (LC-MS).

A continuación, se cita un estudio vinculado con la temática: Hernandes, V. V., Zeyda, M., Wisgrill, L., & Warth, B. (2025). Dried blood spots analysis for targeted and non-targeted exposomics. Environment International, 109814.

Hisopados

Estas muestras serán utilizadas para la identificación de microorganismos, tales como virus y bacterias. También podrían servir para la identificación de genes de resistencia antimicrobiana y de resistencia a metales pesados, siempre que la cantidad y concentración del ADN ó ARN lo permita.

A cada hisopo se le extraerá el ADN y ARN usando kits comerciales, tales como el QIAmp PoweFecal Pro DNA Kits- stool/Gut, siguiendo las instrucciones del fabricante. Posteriormente, se llevará a cabo el análisis metagenómico tanto para el ADN como para el ARN, con el fin de identificar todos los genes que estén en cada muestra. El objetivo es describir los resultados metagenómicos con respecto a su exposición a contaminantes. Este servicio será contratado a empresas en el exterior del país, tales como la Universidad Sueca de Ciencias Agrícolas (Sveriges lantbruksuniversitet, SLU), Macrogen, Novagen, entre otros.

A continuación, se encuentra un estudio que se utilizará como base para los análisis: Bergner, L. M., Orton, R. J., da Silva Filipe, A., Shaw, A. E., Becker, D. J., Tello, C., & Streicker, D. G. (2019). Using noninvasive metagenomics to characterize viral communities from wildlife. Molecular ecology resources, 19(1), 128-143.

El método de caracterización del microbioma en estas muestras dependerá de la cantidad de ADN y ARN y de los resultados de los demás análisis (por ejemplo, nivel de contaminantes) así como el costo del tipo de secuenciación basado en el número de muestras. Esperamos como mínimo emplear qPCR para detectar la presencia de virus objetivo comúnmente monitoreados en murciélagos neotropicales y con potencial zoonótico por ejemplo: coronaviruses (e.g, CoV_16486F (5'-GCGTATGTGTTGTCTTGGTC-3') y CoV_19013R (5'-ACTAACTGCAACCCCGTTAA-3')), hantaviruses (e.g., XSV: CTA CGA AGC TGC AAA GGT GG), filiviruses (e.g., RVS: TYTCHVTICA AAICA YTGGGG DFA GAYTTYGGRMTNGARCCNTAYCC), y mixovirus (e.g., morbilivirus: TCITTCTTTAGAACITTYGGNCAYCC)y otros primers relevantes para la región reportados en la literatura.

También se espera realizar una secuenciación de última generación como secuenciación de tipo "shotgun" para describir el viroma y bacterioma de las muestras. Para ello, se seguirán los métodos propuestos por Bergner et al. 2019 y Djikeng et al. 2008 usando primer universales comerciales como Dual Index Primers Set 1, New England Biolabs (e.g., K-8N (GACCATCTAGCGACCTCCAC NNNNNNNN) y K-8N (GACCATCTAGCGACCTCCAC NNNNNNNN)).

Metabarcoding

En el ADN extraído de las heces, se llevará a cabo el análisis de dietas mediante metabarcoding. Para este proceso, se espera contratar el servicio de secuenciación, por ejemplo, el SciLife Sweden. Se espera amplificar marcadores de “metabarcoding” cortos dirigidos a diferentes grupos tróficos para la caracterización de la dieta, tales como el 12S (mini-barcode, ~100–140 bp) para vertebrados, amplificado con primers como 12SV5-F (5’-TAGAACAGGCTCCTCTAG-3’) y 12SV5-R (5’-TTAGATACCCCACTATGC-3’); COI (mini-barcode, ~130 bp) para invertebrados, utilizando los primers mlCOIintF (5’-GGWACWGGWTGAACWGTWTAYCCYCC-3’) y jgHCO2198 (5’-TAIACYTCIGGRTGICCRAARAAYCA-3’); y trnL (loop P6, ~10–140 bp) para plantas, con primers como g (5’-GGGCAATCCTGAGCCAA-3’) y h (5’-CCATTGAGTCTCTGCACCTATC-3’).

A continuación, se cita un estudio que se utilizará como referencia: Ingala MR, Simmons NB, Wultsch C, Krampis K, Provost KL, Perkins SL. Molecular diet analysis of neotropical bats based on fecal DNA metabarcoding. Ecol Evol. 2021 May 2;11(12):7474-7491. doi: 10.1002/ece3.7579. PMID: 34188828; PMCID: PMC8216975.

Biopsias de ala

Aunque las muestras de hisopado bucal permiten obtener ADN de murciélagos de forma no invasiva, su rendimiento y pureza suelen ser insuficientes para realizar análisis genómicos de alta calidad, como estudios de variación poblacional usando SNIPs. Por ello, se propone complementar este método con una pequeña biopsia de ala (2–3 mm) del plagiopatagio, procedimiento ampliamente utilizado y con mínima afectación para el animal. Este tipo de muestra proporciona mayor cantidad y calidad de ADN nuclear y reduce la contaminación con ADN ambiental o microbiano. Además, el tejido de ala cicatriza rápidamente y no compromete la capacidad de vuelo ni la supervivencia. Este tipo de muestra servirá para la identificación de las especies de murciélago.

Estas muestras se transportarán congeladas (-20 °C) al Laboratorio de Ecotoxicología del IRET, donde se extraerá ADN genómico usando un kit comercial como el QIAamp DNA Mini Kit (Qiagen). El servicio de secuenciación mediante técnicas de nueva generación será contratado a otras instituciones, tales como Novagen, Macrogen o el Departamento de peces, vida silvestre y estudios ambientales de la Universidad Sueca de Ciencias Agrícolas (Sveriges lantbruksuniversitet, SLU), donde se seguirá la metodología estandarizada por dicho ente. En caso de ser posible para la empresa contratada y de acuerdo con la búsqueda bibliográfica que se realice, se propondrá la realización de la secuenciación utilizando primers universales, por ejemplo, para las regiones mitocondriales COI, Cytb y D-loop. En el caso de COI, se pueden emplear los primers LCO1490 (5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’) y HCO2198 (5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’); para Cytb, se consideran los pares L14724 (5’-CGAAGCTTGATATGAAAAACCATCGTTG-3’) y MVZ16 (5’-AAATAGGAARTATCAYTCTGGTTTRAT-3’), así como L15162 (5’-TGAYATGAAAAACCATCGTTG-3’) y H15915 (5’-CTCCGATCTTCGGATTACAAGAC-3’); y para D-loop, los primers L15926 (5’-ACACCAGTCTTGTAAACCAAAA-3’) y H16498 (5’-CCTGAAGTAGGAACCAGATG-3’).

También se utilizará como referencia el procedimiento indicado en la siguiente cita: Corthals, A., Martin, A., Warsi, O. M., Woller-Skar, M., Lancaster, W., Russell, A., & Dávalos, L. M. (2015). From the Field to the Lab: Best Practices for Field Preservation of Bat Specimens for Molecular Analyses. PLOS ONE, 10(3), e0118994. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0118994

Genes de resistencia a antimicrobianos (ARGs):

Se espera identificar y cuantificar la presencia de genes de resistencia a antimicrobianos en todas las muestras que se colecten. Para ello, se analizará el ADN que se extraiga. La cuantificación de ARGs en el ADN extraído de las muestras que se colecten se llevará a cabo mediante qPCR. Los genes serán elegidos tomando en cuenta los reportes de estudios previos, tanto a nivel internacional como nacional (Blanco-Peña et al., 2024; Curutiu et al., 2017; He et al., 2020; Vargas-Villalobos et al., 2023; Zalewska et al., 2021). En el caso de los ARGs, podrían analizarse genes que codifiquen resistencia para betalactámicos (blaCtX), macrólidos (ermB), quinolonas (qnrS), tetraciclinas (tetA, tetB, tet Q, tet W, tetY), sulfonamidas (sul I, sul II) y fenicoles (cat II), por ejemplo. Para su cuantificación porcentual, se utilizará como base el gen 16S rRNA, que es un marcador taxonómico esencial para las comunidades bacterianas (Villalpando et al., 2018). Las muestras positivas para 16S serán aquellas cuyo ciclo umbral (Ct) sea inferior a 25. En el caso de los resultados para ARGs, una muestra se considerará positiva si el Ct es menor a 30.

El porcentaje de carga de un ARG se calculará mediante la fórmula:

log10(ARG%) =2 + 0,33*(ct16s - ctgenARG),

donde ct16s es el ciclo umbral para la determinación bacteriana, ctgenARG corresponde al ciclo umbral para cada gen y el valor 0,33 es la pendiente media para todos los genes analizados (Angulo et al., 2023, 2023; NietoClaudin et al., 2019; Sacristán et al., 2020).

Los resultados se expresarán en log10 del porcentaje hipotético de bacterias que presenta cada gen para la carga porcentual de ARG. Todas las qPCR se realizarán en un sistema de detección de PCR en tiempo real táctil CFX96, utilizando SYBR Green®. Los ARGs serán secuenciados para realizar análisis filogenéticos que permitan revelar su asociación taxonómica. Con estos resultados, será posible también identificar las muestras con microbiomas multirresistentes (Blanco-Peña et al. 2017), que son aquellas con al menos tres ARG que codificaban resistencia a diversas clases de antimicrobianos. Esta clasificación ayuda a distinguir entre "microbiomas multirresistentes" y "microbiomas no multirresistentes".

Actualmente se están definiendo los mejores primers y los genes ARGs más indicados para realizar el análisis. Estos serán definidos según los hallazgos de los fármacos que se encuentren en aguas de ríos y sangre de los murciélagos. Sin embargo, se citan a continuación algunos de los que se podrían analizar: 16S rRNA (515F: TCGAAGTATGGTAATTGTGTGYCAGCMGCCGCGGTAA y 806R: AGTCAGCCAGCCGGACTACNVGGGTWTCTAAT), blaTEM (resistencia a beta-lactámicos, F: CACTATTCTCAGAATGACTTGGT, R: TGCATAATTCTCTTACTGTCATG), erm(B) (macrólidos, F: CCGAACACTAGGGTTGCTC, R: ATCTGGAACATCTGTGGTATG), catI (cloranfenicol, F: GGTGATATGGGATAGTGTT, R: CCATCACATACTGCATGATG), catII (F: GATTGACCTGAATACCTGGAA, R: CCATCACATACTGCATGATG), qnrS (quinolonas, F: GACGTGCTAACTTGCGTGAT, R: TGGCATTGTTGGAAACTTG), sulI (sulfonamidas, F: CACCGGAAACATCGCTGCA, R: AAGTTCCGCCGCAAGGCT), sulII (F: CTCCGATGGAGGCCGGTAT, R: GGGAATGCCATCTGCCTTGA), tetA (tetraciclinas, F: TCAATTTCCTGACGGGCTG, R: GAAGCGAGCGGGTTGAGAG), tetB (F: CGCCCAGTGCTGTTGTTGTC, R: CGCGTTGAGAAGCTGAGGTG), tetQ (F: AGAATCTGCTGTTTGCCAGTG, R: CGGAGTGTCAATGATATTGCA) y tetW (F: GAGAGCCTGCTATATGCCAGC, R: GGGCGTATCCACAATGTTAAC).

A continuación, se cita también un estudio donde se analizaron genes de resistencia antimicrobiana en murciélagos, el cual se utilizará también como referencia:
• Devnath, P., Karah, N., Graham, J. P., Rose, E. S., & Asaduzzaman, M. (2023). Evidence of Antimicrobial Resistance in Bats and Its Planetary Health Impact for Surveillance of Zoonotic Spillover Events: A Scoping Review. International Journal of Environmental Research and Public Health, 20(1), 243. https://doi.org/10.3390/ijerph20010243

Macroinvertebrados

Las muestras de macroinvertebrados serán analizadas utilizando un estereoscopio y claves de identificación pertinentes.

Ectoparásitos

En caso de que se encontraran ectoparásitos en los murciélagos, se colectarán 30 de ellos por animal para su identificación macroscópica, utilizando un estereoscopio y guías de identificación relevantes para la especie. Estos serán colectados en viales con etanol al 70% o sin él.

Conditions de transfert vers une tiers partie

Documentation

Copie du permis ou de son équivalent, ou de tout autre document pertinent non confidentiel

R-CM-UNA-002-2026-OT-CONAGEBIO FL-firmado.pdf [ Spanish ]

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